এল-থিওগ্লুটামিক অ্যাসিডএকটি প্রাকৃতিক পণ্য যৌগ যা গ্র্যানিমন্ডা সবজি যেমন কেল, সরিষার শাক এবং ব্রকোলিতে গ্লুকোসিনোলেটের মতো অগ্রদূত থেকে রূপান্তরিত হয়। এটির বিভিন্ন ধরনের স্বাস্থ্যগত প্রভাব রয়েছে এবং ক্যান্সার, কার্ডিওভাসকুলার ডিজিজ এবং ডায়াবেটিসের মতো দীর্ঘস্থায়ী রোগ প্রতিরোধে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। এটি ক্রুসিফেরাস উদ্ভিদে ব্যাপকভাবে পাওয়া যায়, যেমন কেল, ফুলকপি এবং বাঁধাকপি। এটিতে অনেক ফার্মাকোলজিকাল কার্যকলাপ রয়েছে, যেমন ক্যান্সার প্রতিরোধী, প্রদাহরোধী, অ্যান্টিঅক্সিডেটিভ, নিউরোপ্রোটেক্টিভ ইত্যাদি। তাই, এল-থিওগ্লুটামিক অ্যাসিডের সিন্থেটিক পদ্ধতি অনেক মনোযোগ আকর্ষণ করেছে।
বর্তমানে, এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড সংশ্লেষণের পদ্ধতিগুলিকে দুটি ভাগে ভাগ করা যায়: জৈবিক গাঁজন এবং রাসায়নিক সংশ্লেষণ। এই দুটি পদ্ধতি নীচে বিশদভাবে বর্ণনা করা হয়েছে।
এল-সালফোরাফেন জৈবিক গাঁজন পদ্ধতি:
জৈবিক গাঁজন পদ্ধতি হল অণুজীবের সাথে যৌগ সংশ্লেষণ করার একটি পদ্ধতি। ব্যাকটেরিয়া স্ট্রেনের স্ক্রীনিং এবং সংস্কৃতির অবস্থার অপ্টিমাইজেশনের মাধ্যমে, অণুজীবগুলি গাঁজন প্রক্রিয়ার সময় এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড তৈরি করতে পারে। এখন এটি পাওয়া গেছে যে অনেক স্ট্রেন এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড সংশ্লেষ করতে পারে, যেমন এসচেরিচিয়া কোলাই, স্ট্রেপ্টোকক্কাস থার্মোফিলাস ইত্যাদি। তাদের মধ্যে, Escherichia coli দ্বারা উপস্থাপিত স্ট্রেন দ্বারা L-thioglutamic অ্যাসিড সংশ্লেষণের পদ্ধতিটি সবচেয়ে সাধারণ। নির্দিষ্ট পদক্ষেপ নিম্নরূপ:
1. মাটি বা উদ্ভিদের টিস্যু থেকে এল-থায়োগ্লুটামেট-উৎপাদনকারী স্ট্রেন, যেমন এসচেরিচিয়া কোলিকে বিচ্ছিন্ন করুন;
2. Escherichia coli চাষের জন্য উপযুক্ত মাধ্যম এবং সংস্কৃতির অবস্থা, যেমন তাপমাত্রা, pH মান, সংস্কৃতির সময় ইত্যাদি গ্রহণ করুন;
3. Escherichia coli fermentation broth সংগ্রহ করুন, নির্দিষ্ট প্রক্রিয়াকরণ ও পরিশোধন করুন এবং L-thioglutamic অ্যাসিড পান।
এল-সালফোরাফেন রাসায়নিক সংশ্লেষণ পদ্ধতি:
রাসায়নিক সংশ্লেষণ পদ্ধতি হল রাসায়নিক আণবিক বিক্রিয়ার পদ্ধতি ব্যবহার করে এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিডকে বিভিন্ন সিন্থেটিক রুটের মাধ্যমে সংশ্লেষণ করা। বর্তমানে, রাসায়নিক সংশ্লেষণ পদ্ধতিগুলি প্রধানত চার প্রকারে বিভক্ত: কোলিন লবণ পদ্ধতি, সালফারিল ক্লোরাইড পদ্ধতি, কার্বনাইল হ্রাস পদ্ধতি এবং অ্যাগারোজ সালফেট পদ্ধতি।
1. কোলিন লবণ পদ্ধতি:
এই পদ্ধতিটি সাধারণত ব্যবহৃত সিন্থেটিক পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি। নিম্নলিখিত হিসাবে এগিয়ে যান:
① প্রথমত, এল-মিথিওনিন এবং কোলিন অ্যাসিডিক অবস্থায় বিক্রিয়া করে এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিডের বিরল নাইট্রোজেন বিকল্প তৈরি করে।
② ক্ষারীয় অবস্থার অধীনে এল-থিওগ্লুটামিক অ্যাসিডে নাইট্রোজেনকে গরম করা এবং হাইড্রোলাইজ করা।
এই পদ্ধতির সুবিধা হল প্রতিক্রিয়া সহজ এবং আয়ত্ত করা সহজ, কিন্তু ফলন কম।
2. সালফোনাইল ক্লোরাইড পদ্ধতি:
এই পদ্ধতিটি এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড সংশ্লেষণের জন্য ইলেক্ট্রোফিলিক প্রতিস্থাপন প্রতিক্রিয়া ব্যবহার করে। নিম্নলিখিত হিসাবে এগিয়ে যান:
① এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড সালফিনেট পেতে ক্ষারীয় অবস্থায় এল-মিথিওনাইন এবং সালফোনাইল ক্লোরাইডের প্রতিক্রিয়া।
② এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড তৈরি করতে ক্ষারীয় অবস্থায় সালফিনেট হাইড্রোলাইজ করা হয়।
এই পদ্ধতির সুবিধা হল প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করা সহজ এবং ফলন বেশি, তবে এটিতে বিষাক্ত সালফোনাইল ক্লোরাইড ব্যবহার করা প্রয়োজন।
3. কার্বনিল হ্রাস পদ্ধতি:
পদ্ধতি হল L-থিওগ্লুটামিক অ্যাসিড সংশ্লেষিত করার জন্য হ্রাস প্রতিক্রিয়া ব্যবহার করা। নিম্নলিখিত হিসাবে এগিয়ে যান:
①L-মেথিওনিন অ্যাসিটোনিমাইনের সাথে বিক্রিয়া করে পাইরিডিন পাইরিমিডিন-2-en-4-এক এবং পাইরিমিডিন পাইরিমিডিন-2-en-4-এক-5-সালফেট তৈরি করে
②পাইরিমিডিন পাইরিমিডিন-2-en-4-এক-5-সালফেট এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড পাওয়ার জন্য হ্রাস করা হয়।
4. অ্যাগারোজ সালফেট পদ্ধতি: এই পদ্ধতি হল এল-মিথিওনিন এবং অ্যাগারোজ সালফেটকে অ্যাসিডিক অবস্থায় বিক্রিয়া করে এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড তৈরি করা। সালফেটের ভাল অনুঘটক কার্যকলাপের কারণে, প্রতিক্রিয়া দক্ষতা এবং নির্বাচনীতা উন্নত হয়। উচ্চতর, কিন্তু কাজ করা আরও কষ্টকর।
বৈজ্ঞানিক গবেষণায়, এল-সালফোরাফেন সনাক্তকরণ অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। তাদের মধ্যে, অ্যাগারোজ সালফেট পদ্ধতি ক্লাসিক সনাক্তকরণ পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি। অ্যাগারোজ সালফেট পদ্ধতি এবং এর ধাপগুলি নীচে বিস্তারিতভাবে বর্ণনা করা হবে।
পরীক্ষামূলক নীতি
অ্যাগারোজ সালফেট পদ্ধতিটি এল-থিওগালাকটোপিরিন এবং বেরিয়াম সালফেটের একটি হলুদ কমপ্লেক্স গঠনের উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে, অ্যাসিডিক অবস্থার অধীনে গঠিত একটি লবণ, এল- সালফোরাফেনের পদ্ধতিকে আলাদা করার জন্য অ্যাগারোজকে স্ক্যাফোল্ড হিসাবে ব্যবহার করে। পদ্ধতিটি এই সত্যের উপর ভিত্তি করে যে অ্যাসিডিক অবস্থার অধীনে, বেরিয়াম সালফেট এবং এল-সালফোরাফেনের প্রতিক্রিয়া দ্বারা গঠিত হলুদ কমপ্লেক্সটি জলে সহজে দ্রবণীয় নয় এবং অ্যাগারোসে অবক্ষয় হয়, যাতে এল-সালফোরাফেনকে আলাদা করে সনাক্ত করা যায়।
পরীক্ষামূলক পদক্ষেপ:
ধাপ 1: অ্যাগারোজ-বেরিয়াম সালফেট সাসপেনশন প্রস্তুত করুন
উপযুক্ত পরিমাণে অ্যাগারোজ এবং বেরিয়াম সালফেট ওজন করুন, মেশানোর পরে নির্দিষ্ট পরিমাণ পাতিত জল যোগ করুন এবং ভালভাবে নাড়ুন, দ্রবীভূত বা সমানভাবে মিশ্রিত হওয়া পর্যন্ত তাপ দিন, 0.22um এর ছিদ্রযুক্ত ফিল্টার দিয়ে সাসপেনশনটি ফিল্টার করুন, এবং তারপর 3 থেকে 5 মিনিট সিদ্ধ করুন। যখন সাসপেনশন 50 ডিগ্রির নিচে ঠাণ্ডা হয়ে যায় কিন্তু এখনও শক্ত না হয়, তখন একটি পেট্রি ডিশে দ্রবণটি ঢেলে দিন এবং এটি শক্ত না হওয়া পর্যন্ত ঘরের তাপমাত্রায় রাখুন।
ধাপ 2: নমুনা প্রস্তুতি এবং প্রক্রিয়াকরণ:
পরীক্ষা করার জন্য নমুনা বা মান ওজন করুন, পর্যাপ্ত {{0}} যোগ করুন।{9}} দ্রবীভূত করার জন্য 1 এম সোডিয়াম পাইরোফসফেট দ্রবণ, নিষ্কাশনের জন্য ক্লোরোফর্মের অনুরূপ ভলিউম যোগ করুন, 10-15 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন , উপরের স্তরের তরল অপসারণ করুন, অবশিষ্টাংশ সংগ্রহ করতে ক্লোরোফর্মকে বাষ্পীভূত করুন, 2 মিলি জল এবং 2 মিলি ঘনীভূত হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড যোগ করুন, ক্লোরোফর্ম দিয়ে আবার বের করে, সেন্ট্রিফিউজ করা হয় এবং উপরের স্তরটি নেওয়া হয়। 24mL উপরের তরল নিন, 0.2 mL 2 শতাংশ কপার নাইট্রেট দ্রবণ এবং 0.4 mL 5 শতাংশ সীসা নাইট্রেট দ্রবণ যোগ করুন, ক্লোরোফর্ম, সেন্ট্রিফিউজ দিয়ে একবার বের করুন এবং উপরের তরল নিন, যা পরীক্ষার জন্য পরীক্ষামূলক নমুনা হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।
ধাপ 3: পুনর্বিশ্লেষণ পরীক্ষা:
নমুনাগুলি অ্যাগারোজ-বেরিয়াম সালফেট সাসপেনশনে যুক্ত করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য 80 ডিগ্রিতে শক্ত হওয়ার জন্য একটি জলের স্নানে উত্তপ্ত করা হয়েছিল। নমুনা শক্ত হওয়ার পরে, অ্যাগারোজ-বেরিয়াম সালফেট সাসপেনশন ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা হয় এবং অ্যাগারোজ-বেরিয়াম সালফেট-নমুনা কমপ্লেক্স সাইট্রিক অ্যাসিড এবং অ্যামোনিয়াম লবণের বাফার অবস্থার অধীনে দ্রবীভূত হয়। সবশেষে, ক্রমানুসারে জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন এবং আগারোজ গোলকের কমপ্লেক্সের রঙ দৃশ্যত পরিদর্শন করুন।
ধাপ 4: ফলাফল বিশ্লেষণ:
একটি স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা তৈরি করার জন্য পুনঃবিশ্লেষণের পরে পরিস্রাবণের শোষণ পরিমাপ করুন, যার ফলে এল-সালফোরাফেনের বিষয়বস্তু পাওয়া যায়।
এল-সালফোরাফেনকে আলাদা এবং সনাক্ত করার জন্য অ্যাগারোজ সালফেট পদ্ধতি একটি ক্লাসিক পদ্ধতি। ধাপগুলির একটি সিরিজের মাধ্যমে, এল-সালফোরাফেনকে আলাদা করা যায় এবং এর বিষয়বস্তু সনাক্ত করা যায়। পদ্ধতিটির সরলতা, উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং সঠিক ফলাফলের সুবিধা রয়েছে এবং এটি সাধারণত খাদ্য, প্রসাধনী এবং ফার্মাসিউটিক্যালসে এল-সালফোরাফেন সনাক্তকরণে ব্যবহৃত হয়।
সারাংশ: বিজ্ঞান ও প্রযুক্তির বিকাশের সাথে সাথে, এল-থায়োগ্লুটামিক অ্যাসিড সংশ্লেষণের পদ্ধতি ক্রমাগত অপ্টিমাইজ করা এবং উন্নত করা হচ্ছে। একই সময়ে, জৈবিক গাঁজন পদ্ধতি এবং রাসায়নিক সংশ্লেষণ পদ্ধতিরও তাদের নিজস্ব সুবিধা এবং অসুবিধা রয়েছে এবং কোন পদ্ধতিটি ব্যবহার করা হবে তা প্রকৃত পরিস্থিতির উপর নির্ভর করে।